• / 20
  • 下載費用:30 金幣  

一種替諾福韋前藥及其在醫藥上的應用.pdf

關 鍵 詞:
一種 替諾福韋前藥 及其 醫藥 應用
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
摘要
申請專利號:

CN201310041647.4

申請日:

2013.02.01

公開號:

CN103665043A

公開日:

2014.03.26

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||著錄事項變更IPC(主分類):C07F 9/6561變更事項:申請人變更前:江蘇豪森藥業有限公司變更后:江蘇豪森藥業集團有限公司變更事項:地址變更前:222047 江蘇省連云港市開發區第十工業小區變更后:222047 江蘇省連云港市開發區第十工業小區|||著錄事項變更IPC(主分類):C07F 9/6561變更事項:申請人變更前:江蘇豪森藥業股份有限公司變更后:江蘇豪森藥業有限公司變更事項:地址變更前:222047 江蘇省連云港市開發區第十工業小區變更后:222047 江蘇省連云港市開發區第十工業小區|||實質審查的生效IPC(主分類):C07F 9/6561申請日:20130201|||專利申請權的轉移IPC(主分類):C07F 9/6561變更事項:申請人變更前權利人:上海源力生物技術有限公司變更后權利人:江蘇豪森藥業股份有限公司變更事項:地址變更前權利人:201203 上海市浦東新區張江高科技園區蔡倫路399號變更后權利人:222047 江蘇省連云港市開發區第十工業小區登記生效日:20140508|||公開
IPC分類號: C07F9/6561; A61K31/675; A61P31/18; A61P31/20; A61P29/00; A61P1/16 主分類號: C07F9/6561
申請人: 上海源力生物技術有限公司
發明人: 張富堯; 魏東
地址: 201203 上海市浦東新區張江高科技園區蔡倫路399號
優先權: 2012.08.30 CN 201210315565.X
專利代理機構: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314 代理人: 程偉
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201310041647.4

授權公告號:

|||||||||||||||

法律狀態公告日:

2017.11.10|||2016.04.06|||2016.04.06|||2015.07.08|||2014.06.04|||2014.03.26

法律狀態類型:

授權|||著錄事項變更|||著錄事項變更|||實質審查的生效|||專利申請權、專利權的轉移|||公開

摘要

本發明涉及一種替諾福韋前藥及其在醫藥上的應用。具體而言,本發明涉及一種如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,以及它們在制備治療病毒感染性疾病特別是艾滋病(HIV)感染、乙型肝炎和乙肝病毒引起的疾病的藥物中的應用,其中通式(I)中的各取代基的定義與說明書中的定義相同。

權利要求書

權利要求書
1.  一種如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,

其中:
R1,R2分別為C1-6烷基,或者R1、R2與所連的碳原子形成C3-7環烷基;
R3是氫或C1-6烷基、取代或非取代的C6-10芳基或6至10元雜芳基;Ar為取代或非取代的C6-10芳基或6至10元雜芳基。

2.  根據權利要求1所述的如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,其特征在于,所述通式(I)所示的化合物中磷原子具有手性,其構型是S-或R-構型,或者是S-構型和R-構型的混合物。

3.  根據權利要求1或2中所述的如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,其特征在于,所述異構體是互變異構體、順反異構體、構象異構體、內消旋化合物和具有對映或非對映關系的光學異構體。

4.  根據權利要求1所述的如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,其選自:


5.  根據權利要求1所述的如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,其選自:


6.  一種如式(Ia1)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,


7.  一種藥物組合物,其含有根據權利要求1-6中任一項所述的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物與藥學上可接受的載體。

8.  根據權利要求7所述的藥物組合物,其中所述藥學上可接受載 體選自注射用水、凍干粉劑輔料或口服制劑輔料。

9.  根據權利要求1-6中任一項所述的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物在制備治療病毒感染性疾病的藥物中的用途,優選在制備治療艾滋病感染、乙型肝炎或乙肝病毒引起的疾病的藥物中的用途。

10.  根據權利要求7或8所述的藥物組合物在制備治療病毒感染性疾病的藥物中的用途,優選在制備治療艾滋病感染、乙型肝炎或乙肝病毒引起的疾病的藥物中的用途。

說明書

說明書一種替諾福韋前藥及其在醫藥上的應用
技術領域
本發明涉及一種替諾福韋前藥或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,及其在醫藥上的應用。
背景技術
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus)是指引起人類急性肝炎和慢性肝炎的DNA病毒,簡稱HBV。由于HBV感染直接導致人類嚴重的肝臟疾病,包括肝硬化和肝細胞癌,因此,乙型肝炎是人類健康的一大威脅。乙型肝炎病毒DNA(脫氧核糖核酸),是乙肝病毒的核心物質和病毒復制的基礎,核苷類化合物可通過直接競爭性地與天然脫氧核糖底物相結合而抑制病毒聚合酶,及通過插入DNA中終止DNA鏈,因此核苷類化合物是治療乙型肝炎的主要藥物,其中包括,西多福韋、阿德福韋、拉米夫定以及替諾福韋(tenofovir)等。替諾福韋是一種新型核苷酸類逆轉錄酶抑制劑,可有效對抗多種病毒,用于治療病毒感染性疾病。由于替諾福韋在生理pH條件下為雙負離子的膦酸基團,故替諾福韋不易透過細胞膜吸收,生物利用度很低,并且還存在劑量依賴性腎毒性,限制了其治療作用,因此必須通過酯化、成鹽等手段制成膦酸酯前藥才能用于臨床。例如,富馬酸替諾福韋酯(Tenofovir disoproxil fumarate)是吉里德科學公司(Gilead Science)研發的第一代口服有效的替諾福韋前藥,用于治療艾滋病感染和乙型肝炎。

由于富馬酸替諾福韋酯對由血清酶介導的水解反應高度敏感,不能有效增加作用部位藥物濃度,同時在代謝過程釋放兩當量的具有潛在毒性的甲醛,在臨床治療過程中發現乳酸性酸中毒,嚴重的肝腫大,以及脂肪代謝障礙等副作用。為了提高替諾福韋前藥在血漿中的穩定性,降低其代謝產物-替諾福韋在血漿中的濃度從而降低藥物毒性,許多制藥公司正在進行研究和開發新一代替諾福韋前藥,并已取得了一些成果,有的新型前藥已處在I/II臨床研究階段,例如,WO0208241披露了一類用天然氨基酸(單取代)合成的替諾福韋磷酰胺酯前藥(例如,GS-7340),WO2009105513公開了一類新型替諾福韋磷酸雙酰胺前藥,與替諾福韋磷酸雙酯相比,此類新型前藥增加了血漿中的穩定性,從而增加了外周血單核細胞(PBMCs)中活性代謝物替諾福韋的累積濃度,提高了治療效果,例如,GS-7340與替諾福韋酯和替諾福韋相比,GS-7340在PBMCs中產生的活性成分替諾福韋總濃度為替諾福韋酯和替諾福韋的10倍和30倍。然而,GS-7340在血漿中還有一定程度的降解,在血漿中可檢測到1-2%的代謝產物-替諾福韋,從而不可避免地存在像替諾福韋酯所產生的毒副作用,導致藥物使用的安全性存在問題。因此,進一步研究開發具有高療效低毒性的替諾福韋前藥具有重要意義。本發明從進一步提高替諾福韋前藥在血漿中的穩定性設計理念出發,利用雙取代氨基酸合成了一系列替諾福韋磷酰胺酯前藥,該類前藥一方面在血漿中非常穩定,在血漿中完全沒有檢測到代謝產物-替諾福韋,另一方面,與GS-7340相比,外周血單核細胞(PBMCs)中活性代謝物替諾福韋的濃度顯著增加,從而有可能提供一類提高療效減低毒副作用的新型替諾福韋前藥。
發明內容
發明人意外地發現了一些與現有技術相比藥效更高而副作用大幅降低的化合物,與GS-7340相比,本發明化合物在血漿中足夠穩定,其代謝產物-替諾福韋在血漿中完全檢測不到,而其在PBMCs中的濃度反而大大提高了,這樣的結果完全出乎本領域技術人員預料之外。
本發明涉及一種如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物,

其中:
R1,R2分別為C1-6烷基,或者R1、R2與所連的碳原子形成C3-7環烷基;
R3是氫或C1-6烷基、取代或非取代的C6-10芳基或6至10元雜芳基;
Ar為取代或非取代的C6-10芳基或6至10元雜芳基。
本發明所述通式(I)所示的化合物可作為替諾福韋的前藥,該類前藥在血漿中穩定,而且在外周血單核細胞(PBMCs)中的活性代謝物替諾福韋的濃度與GS-7340相比顯著提高。
所述的如通式(I)所示的化合物中磷原子具有手性,其構型是S-或R-構型,或者是S-構型和R-構型的混合物。
在本發明的具體實施方案中,如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物中,所述異構體包括互變異構體、順反異構體、構象異構體、內消旋化合物和具有對映或非對映關系的光學異構體。
在本發明的優選的具體實施方案中公開了具有如下的結構的化合物,但本發明的如通式(I)所示的化合物不僅限于以下結構:

在本發明的優選的具體實施方案中進一步公開了具有如下的結構的手性化合物,但本發明的如通式(I)所示的化合物不僅限于以下結構:

本發明的如通式(I)所示的化合物可經如下方法制備得到:

其中,如通式(II)所示的化合物可通過中國專利ZL01813161.1中提供的方法制備,也可通過本領域的其它常規方法使用替諾福韋制備得到。
手性異構體(I1)可以通過對異構體混合物(I’)的反相柱分離或手性柱分離得到。

本發明還提供了一種藥物組合物,其含有如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物與藥學上可接受載體,其中藥學上可接受載體可以選自注射用水、凍干粉劑輔料或口服制劑輔料。
本發明另一方面還涉及如通式(I)所示的化合物或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物或前述的藥物組合物在制備治療病毒感染性疾病的藥物中的用途,優選在制備治療乙型肝炎或乙肝病毒引起的疾病的藥物中的用途。
除非有相反陳述,本發明中的術語具有下列的含義:
“烷基”指飽和的脂族烴基團,包括1至6個碳原子的直鏈和支鏈基團。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或未取代的,當被取代時,取代基可以在任何可使用的連接點上被取代,優選為一個或多個以下基團,獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代。
“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基,其包括3至7個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包含環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基等。多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。環烷基可以是取代的或未取代的,當被取代時,取代基優選為一個或多個以下基團,獨立地選自烷基、烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環 烷基、芳基、雜芳基。
“芳基”指6至10元全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團,具有共軛的π電子體系的多環(即其帶有相鄰對碳原子的環)基團,例如苯基和萘基。芳基可以是取代的或未取代的,當被取代時,取代基優選為一個或多個以下基團,獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
“雜芳基”是指包含1、2、3或4個雜原子,6至10個環原子的雜芳族體系,優選5至6個環原子,其中雜原子包括氧、硫和氮;例如吡啶基、嘧啶基等。“雜芳基”可以是任選取代的或未取代的,當被取代時,取代基優選為一個或多個以下基團,獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
具體實施方式
以下將結合具體實施例詳細地解釋本發明,使得本領域技術人員更全面地理解本專利,具體實施例僅用于說明本發明的技術方案,并不以任何方式限定本發明。
實施例1
步驟1:
在0℃下,向苯酚(5g)和三乙胺(10.1mL)的二氯甲烷(150mL)溶液中,滴加三甲基氯硅烷(6.0g),滴加結束后,升溫至20℃,攪拌反應18小時。濾去白色固體,用二氯甲烷洗滌固體。合并濾液,蒸除溶劑后,得到無色油狀苯氧基三甲基硅烷4.2g。
步驟2:

在70℃下,向替諾福韋(1g,從蘇州漢德森醫藥科技有限公司購買)的環丁砜(2.5mL)混濁液中,滴加和DMF(0.1mL)和二氯亞砜(0.73g),升溫至100℃,混合物在100℃下繼續反應1.5小時至混合物全部澄清,快速加入苯氧基三甲基硅烷(0.70g),混合物在100℃下反應1.5小時后,減壓蒸除溶劑,得到粘稠狀黃色油狀液體,甲醇溶解后,用45%的氫氧化鉀水溶液調節pH至3,過濾,干燥得到白色粉末狀固體IIa0.7g。MS(m/z)363.96(MH+).
步驟3:

在60℃下,向化合物IIa(600mg)的環丁砜(1mL)混合物中加入DMF(0.1mL)和二氯亞砜(343mg),混合物在60℃下攪拌反應30分鐘至溶解澄清。在0℃下將上述溶液加到氨基酸酯IIIa(750mg,從上海達瑞精細化學品有限公司購買)和二異丙胺(452mg)的二氯甲烷(7mL)溶液中。升溫至20℃反應2小時,依次用5%磷酸二氫鈉水溶液,飽和食鹽水洗滌后,無水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得黃色油狀粗產物,經柱層析純化后,得到油狀液體產物Ia150mg。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(m,1H),8.05(m,1H),7.36~6.95(m,5H),6.49(b,2H),6.22~5.84(m,1H),5.01(m,1H),4.42(m,1H),4.40~3.60(m,3H),1.52~1.18(m,15H).MS(m/z)491.13(MH+).
手性化合物Ia1和Ia2的制備:
方法一:非手性柱制備:
粗產物Ia(150mg)經HPLC制備分離(制備柱:Waters SymmetryC18,流動相:A:0.02%磷酸水溶液;B:甲醇)后得到50mg化合物Ia1(保留時間:50.65min):MS(m/z)491.17(MH+)和61mg化合物Ia2(保留時間:47.57min):MS(m/z)491.10(MH+).
方法二:手性柱制備:
粗產物Ia(150mg)經HPLC制備分離(制備柱:ChiralpakAS-H, 流動相:A:正己烷;B:乙醇)后得到62mg化合物Ia1(保留時間:6.53min)和78mg化合物Ia2(保留時間:6.11min)。

實施例2

在60℃下,向IIa(600mg)的環丁砜(1mL)混合物中加入DMF(0.1mL)和二氯亞砜(343mg),混合物在60℃下攪拌反應30分鐘至溶解澄清。在0℃下,將上述溶液加到氨基酸酯IIIb(760mg,從上海達瑞精細化學品有限公司購買)和二異丙胺(452mg)的二氯甲烷(7mL)溶液中。升溫至20℃反應2小時,依次用5%磷酸二氫鈉水溶液,飽和食鹽水洗滌后,無水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑,得黃色油狀粗產物,經柱層析純化后,得到油狀液體產物Ib221mg。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(m,1H),8.01(m,1H),7.34~6.95(m,5H),6.48~6.18(m,1H),5.84(b,2H),5.01~4.82(m,1H),4.42(m,1H),4.20~3.60(m,5H),2.68(m,1H),1.41~1.10(m,12H).
粗產物Ib(100mg)經HPLC制備分離(制備柱:ChiralpakAS-H,流動相:A:正己烷;B:乙醇)后得到35mg化合物Ib1。MS(m/z)489.26(MH+).

實施例3
步驟1:
在0℃下,向對氯苯酚(5g)和三乙胺(10.8mL)的二氯甲烷(150mL)溶液中,滴加三甲基氯硅烷(6.3g),滴加結束后,升溫至20℃,攪拌反應18小時。蒸除溶劑后,得到無色油狀對氯苯氧基三甲基硅烷5.1g。
步驟2:

在70℃下,向替諾福韋(1g)的環丁砜(2.5mL)混濁液中,滴加DMF(0.1mL)和二氯亞砜(0.73g),升溫至100℃,混合物在100℃下繼續反應1.5小時至混合物全部澄清,加入對氯苯氧基三甲基硅烷(0.77g),混合物在100℃下反應1.5小時后,減壓蒸除溶劑,得到粘稠狀黃色油狀液體,加甲醇溶解(2mL)后,于0℃用45%的氫氧化鉀水溶液調節pH至3,過濾,干燥得到白色粉末狀固體IIc800mg。MS(m/z)398.05(MH+).
步驟3:

在60℃下,向IIc(600mg)的環丁砜(1mL)混合物中加入DMF(0.1mL)和二氯亞砜(343mg),混合物在60℃下攪拌反應30分鐘至溶解澄清。在0℃下,將上述溶液加到氨基酸酯IIIa(731mg)和二異丙胺(452mg)的二氯甲烷(7mL)溶液中。升溫至20℃反應2小時,依次用5%磷酸二氫鈉水溶液,飽和食鹽水洗滌后,無水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑,得一黃色油狀粗產物,經柱層析純化后得到油狀液體產物Ic121mg。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(m,1H),8.01(m,1H),7.28(m, 1H),7.22(m,1H),7.15~7.13(m,1H),6.94(m,1H),5.88(b,2H),5.07(m,2H),4.42(m,1H),4.21(m,1H),3.90~3.81(m,2H),3.71~3.54(m,1H),1.56~1.24(m,15H).
粗產物Ic(70mg)經HPLC制備分離(制備柱:ChiralpakAS-H,流動相:A:正己烷;B:乙醇)后得到21mg化合物Ic1。MS(m/z)525.26(MH+).

實施例4
步驟1:
在0℃下,向對甲氧基苯酚(5g)和三乙胺(10.8mL)的二氯甲烷(150mL)溶液中,滴加三甲基氯硅烷(6.3g),升溫至20℃攪拌反應18小時。蒸除溶劑后,得到無色油狀對甲氧苯氧基三甲基硅烷4.7g。
步驟2:

在70℃下,向替諾福韋(1g)的環丁砜(2.5mL)混濁液中,滴加和DMF(0.1mL)和二氯亞砜(0.73g),升溫至100℃,混合物在100℃下繼續反應1.5小時至混合物全部澄清,加對甲氧苯氧基三甲基硅烷(0.75g),混合物在100℃下反應1.5小時后,減壓蒸除溶劑,得到粘稠狀黃色油狀液體,加甲醇溶解(2mL)后,于0℃用45%的氫氧化鉀水溶液調節pH至3,過濾,干燥得到白色粉末狀固體IId600mg。MS(m/z)394.11(MH+).
步驟3:

在60℃下,向IId(300mg)的環丁砜(1mL)混合物中加DMF(0.1mL)和二氯亞砜(181mg,1.52mmol),混合物在60℃下攪拌反應30分鐘至溶解澄清。在0℃下將上述溶液加到氨基酸酯IIIa(386mg)和二異丙胺(343mg)的二氯甲烷(5mL)溶液中。升溫至20℃,反應2小時,依次用5%磷酸二氫鈉水溶液,飽和食鹽水洗滌后,無水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑,得黃色油狀粗產物,經柱層析純化后得到油狀液體產物Id40mg。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(m,1H),8.04(m,1H),7.12~6.85(m,4H),5.86(b,2H),5.06(m,1H),4.42(m,1H),4.18(m,1H),4.08~3.94(m,3H),3.82(m,3H),3.77~3.61(m,1H),1.55~1.17(m,15H).
粗產物Id(30mg)經HPLC制備分離(制備柱:Chiralpak AS-H,流動相:A:正己烷;B:乙醇)后得到12mg化合物Id1。MS(m/z)521.23(MH+).

實施例5
按合成化合物Ic和Ic1類似的方法,合成了化合物Ie和Ie1。

Ie:1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(m,1H),8.04(s,1H),7.96(m,1H), 7.84(m,1H),7.62(m,1H),7.52~7.33(m,4H),5.78(b,2H),5.04~4.98(m,1H),4.38~3.71(m,6H),1.57~1.06(m,15H).
Ie1:MS(m/z)541.11.
實施例6
按合成化合物Ic和Ic1類似的方法,合成了化合物If和If1。

If:1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(m,1H),8.02(s,1H),7.81~7.66(m,4H),7.49~7.41(m,2H),7.31~7.06(m,1H),5.72(b,2H),5.06~4.99(m,1H),4.43~4.35(m,1H),4.19~3.91(m,4H),3.74~3.65(m,1H),1.57~1.20(m,15H).
If1:MS(m/z)541.10.
實施例7
按合成化合物Ic和Ic1類似的方法,合成了化合物Ih和Ih1。

Ih:1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(m,1H),7.95(m,1H),7.00~6.95(m,3H),5.83(b,2H),5.05~4.99(m,2H),4.35~4.31(m,1H),4.23~4.17(m,1H),4.01~3.83(m,3H),3.80~3.77(m,1H),2.35(s,3H),2.31(s,3H),1.33~1.19(m,15H).
Ih1:MS(m/z)519.15.
實施例8
按合成化合物Ic和Ic1類似的方法,合成了化合物Ii和Ii1。

Ii:1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(m,1H),8.00(m,1H),7.17(m,1H),7.02(m,1H),6.97(m,2H),5.71(b,2H),5.06(m,1H),4.43(m,1H),4.20(m,1H),4.06~3.84(m,3H),3.72~3.61(m,1H),1.56~1.22(m,15H).
Ii1:MS(m/z)509.25.
實施例9
按合成化合物Ic和Ic1類似的方法,合成了化合物Ij和Ij1。

Ij:1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(m,1H),8.06(s,1H),7.58(m,2H),7.52(m,2H),5.89(b,2H),5.02~4.96(m,1H),4.43~4.36(m,2H),4.04~3.91(m,4H),1.58~1.23(m,15H).
IJ1:MS(m/z)559.08.
實施例10:Ia1富馬酸鹽的制備

在20℃下,向一個單口燒瓶中依次加入化合物Ia1(480mg),富馬酸(120mg)和乙腈,升溫到60℃并在此溫度下攪拌直至固體全部 溶解,繼續攪拌5分鐘,冷卻至20℃,過濾,得白色顆粒狀固體Ia1富馬酸鹽490mg。
1H NMR(400MHz,D2O):δ7.21(m,2H),7.11(m,1H),6.67(m,2H),6.57(s,2H),4.77(m,1H),4.29(m,1H),4.17(m,1H),4.06(m,1H),3.93(m,1H),1.07(m,6H),1.21(m,9H).
實施例11:抗病毒實驗
1、體外抗乙型肝炎病毒活性研究
以HepG2.2.15細胞為乙型肝炎病毒載體,測定化合物抑制乙型肝炎病毒進行DNA復制的能力。
測試方法:HepG2.2.15細胞種96孔培養板,24小時后按不同稀釋度分別加入樣品及陽性對照藥,同時設細胞對照孔,加藥72小時后分別更換含不同稀釋濃度樣品的培養液,于加藥后第6天分別收集細胞上清及2.2.15細胞,采用點雜交的方法檢測細胞中HBV DNA復制程度,計算IC50(結果見表1)。
2、細胞毒性試驗
測試方法:HepG2.2.15細胞種96孔培養板,按不同稀釋度分別加入樣品及陽性對照藥,于加藥后第6天加CellTiter-Blue(Promega,Catalog#G8081),使用Flexstation3儀測得熒光讀數,計算CC50(結果見表1)。
表1、各化合物的HBV抑制率和細胞毒性結果
化合物IC50(nM)Toxicity CC50(nM)陽性對照GS-7171(混合物)35>10000陽性對照GS-7340(手性)14>10000Ia(混合物)21>10000Ia1(手性)5.0>10000Ia2(手性)32>10000Ib1(手性)15>10000Ic1(手性)5.3>10000Id1(手性)6.2>10000Ie1(手性)5.7>10000
If1(手性)7.5>10000Ih1(手性)5.9>10000Ii1(手性)8.3>10000Ij1(手性)7.0>10000
陽性對照藥使用的是中國授權專利ZL01813161.1的實施例2和實施例3中公開的化合物GS-7171和GS-7340,其中GS-7171可拆分成兩個非對映異構體GS-7340和GS-7339,GS7340藥效更佳。
3.實驗結論
實驗結果顯示化合物Ia1、Ib1、Ic1、Id1、Ie1、If1、Ih1、Ii1和Ij1對乙型肝炎病毒DNA復制具有強烈的抑制作用,但沒有細胞毒性,其中化合物Ia1、Ic1、Id1、Ie1、If1、Ih1、Ii1和Ij1對乙型肝炎病毒DNA復制的抑制作用優于陽性化合物GS7340。
實施例12:酸性介質和模擬胃液中的穩定性試驗
1、試劑和原料以及來源
名稱含量廠家胃蛋白酶1:3000倍上海潤捷化學試劑有限公司HCl36%江蘇強盛化工有限公司醋酸銨98.0%國藥集團化學試劑有限公司GS-734098.7%上海源力生物技術有限公司合成Ia198.7%上海源力生物技術有限公司合成
2、試劑的配制
2.1鹽酸溶液(pH2.0)
精密量取4.5mL36%鹽酸到1L容量瓶中,加水至刻度,搖勻備用,標示為儲備液。再精密量取10mL上述溶液至50mL的容量瓶中,加水至刻度,搖勻,測量pH為2.0,標示為鹽酸溶液。
2.2模擬胃液(pH2.0)
精密量取儲備液10mL至50mL容量瓶中,再精確稱取500.0mg的胃蛋白酶至50mL容量瓶中,加水至刻度,超聲溶解(此時溶液不澄清),過濾既得澄清溶液。標示為模擬胃液。
2.3樣品溶液的配制
2.3.1GS-7340鹽酸溶液
精密稱取5.0mg GS-7340到5mL容量瓶中,先加2.5mL異丙醇至容量瓶中,振搖溶解,然后加鹽酸溶液(pH2.0)至刻度。振蕩搖勻,過濾備用。
2.3.2GS-7340模擬胃液溶液
精密稱取5.0mg GS-7340到5mL容量瓶中,先加2.5mL異丙醇至容量瓶中,振搖溶解,然后加模擬胃液至刻度。振蕩搖勻,過濾備用。
2.3.3Ia1鹽酸溶液
精密稱取5.0mg Ia1到5mL容量瓶中,先加2.5mL異丙醇至容量瓶中,振搖溶解,然后加鹽酸溶液(pH2.0)至刻度。振蕩搖勻,過濾備用。
2.3.4Ia1模擬胃液溶液
精密稱取5.0mg Ia1到5mL量瓶中,先加2.5mL異丙醇至容量瓶中,振搖溶解,然后加模擬胃液至刻度。振蕩搖勻,過濾備用。
2.4樣品溶液的取樣
把配制好的樣品裝入進樣小瓶后馬上進樣,作為初始樣品。與此同時把剩余的樣品馬上放入已達到和處于穩定37度的恒溫箱里,6.0小時后取樣進高效液相。
化合物Ia1和GS-7340在酸介質和模擬胃液中的穩定性結果見表2。
表2、化合物Ia1和GS-7340在酸介質和模擬胃液中的穩定性結果

3、實驗結論
實驗結果表明,與用單取代氨基酸制得的替諾福韋磷酰胺酯前藥(GS-7340)相比,用雙取代氨基酸制得的替諾福韋磷酰胺酯前藥(Ia1)在酸介質和模擬胃液中的穩定性顯著提高。
實施例13:替諾福韋前藥在新鮮人全血中的代謝穩定性和在PBMCs細胞中的分布試驗
1、材料
化合物:化合物Ia1和GS-7340
2、試驗方法
在37°C條件下,將不同替諾福韋前藥和新鮮人全血共同孵育,分別在孵育1小時、2小時后分離血漿和PBMC細胞(Ficoll密度梯度離心法),測定血漿和PBMCs細胞中藥物原形及代謝物替諾福韋的濃度,細胞計數儀計算PBMCs細胞,并以每個PBMC細胞為200fL計算細胞內藥物濃度。
3、血漿/PBMC樣品處理
向100μL血漿樣品或PBMC樣品中分別加入20μL內標溶液(400ng/mL SN-38溶液),5.0μL甲醇-水(50:50,v/v)和200μL乙腈,渦流混勻1min,離心5min(14000rpm)。取20μL上清液和180μl流動相混勻,渦流1min,取10μL進行LC/MS/MS分析。
替諾福韋前藥在新鮮人全血中的代謝穩定性和在PBMCs細胞中的分布結果見表3。
表3、替諾福韋前藥在新鮮人全血中的代謝穩定性和在PBMCs細胞中的分布結果

注:PAMA為前藥的活性代謝產物-替諾福韋
4、實驗結論
從表3可以看出,陽性對照物GS-7340在與新鮮人全血共同孵育后,在血漿中檢測到一定量的活性代謝產物-替諾福韋,并且隨著孵育時間的延長,在血漿中所釋放的活性代謝產物-替諾福韋成倍增長,而 本發明的化合物Ia1在與新鮮人全血共同孵育后,完全沒有檢測到活性代謝產物-替諾福韋,并且即使隨著孵育時間的延長,在血漿中始終也未檢測到活性代謝產物-替諾福韋,說明化合物Ia1在血漿中的穩定性顯著優于陽性對照物GS-7340,因此,與陽性對照物GS-7340相比,本發明的化合物Ia1在降低因血漿中代謝生產替諾福韋所產生的毒副作用方面具有顯著的優越性。
從表3還可以看出,隨著孵育時間的延長,本發明化合物Ia1在外周血單核細胞(PBMCs)中的活性代謝產物-替諾福韋的濃度顯著增大,而GS-7340在外周血單核細胞(PBMCs)中的活性代謝產物-替諾福韋的濃度基本上不隨孵育時間的延長而增加。本發明化合物Ia1經2小時孵育后在外周血單核細胞(PBMCs)中的活性代謝產物-替諾福韋的濃度大約是陽性對照物GS-7340的三倍。因此,與陽性對照物GS-7340相比,本發明的化合物Ia1在療效方面也具有顯著的優越性。
由于已根據其特殊的實施方案描述了本發明,某些修飾和等價變化對于精通本領域的技術人員是顯而易見的且包括在本發明的范圍內。

關于本文
本文標題:一種替諾福韋前藥及其在醫藥上的應用.pdf
鏈接地址:http://www.pqsozv.live/p-6180848.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
钻石光影